細(xì)胞培養(yǎng)基的種類按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份,參與細(xì)胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng);后者緩沖能力較強(qiáng),適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。表1-1幾種常用的BSS配方。Eagle培養(yǎng)基由Harry Eagle在Eagle基本培養(yǎng)基(BEM)的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的。湖北華晨陽(yáng)細(xì)胞培養(yǎng)基檢測(cè)
成份解釋:貨號(hào)L-谷氨酰胺L-丙氨酰-L-谷氨酰葡萄糖HEPES酚紅雙抗HCY-BCM07001★★★HCY-BCM07001A★★★★HCY-BCM07002★★★★HCY-BCM07002A★★★★★HCY-BCM07003★★★HCY-BCM07004★★HCY-BCM07005★★★HCY-BCM07006★★★★HCY-BCM07007★★HCY-BCM07008★★★HCY-BCM07009★★HCY-BCM07010★HCY-BCM07011★★HCY-BCM07012★★★HCY-BCM07013★★HCY-BCM07014★HCY-BCM07015★★HCY-BCM07016★★★HCY-BCM07017★HCY-BCM07018★★HCY-BCM07019★HCY-BCM07020HCY-BCM07021★★HCY-BCM07022★HCY-BCM07023ATCC改進(jìn)HCY-BCM07024Dutch改良HCY-BCM07025不含葉酸HCY-BCM07026不含蛋氨酸不含葡萄糖不含酚紅HCY-BCM07027SILACRPMI-1640FlexHCY-BCM07028SILACRPMI-1640RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基L-谷氨酰胺(Glutamine)是細(xì)胞培養(yǎng)中所必要的一種養(yǎng)分要素,但其在溶液中不安定,會(huì)自發(fā)降解,不含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基,可以根據(jù)研究需隨意調(diào)整L-谷氨酰胺的用量,在用到時(shí)添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)。L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(Alanyl-glutamine,Ala-Glu),又名丙氨酰谷氨酰胺、丙谷二肽,是一種高級(jí)細(xì)胞培訓(xùn)添加劑,可直接替代細(xì)胞培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺。重慶昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)基廠家直銷DMEM/F12培養(yǎng)基是在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,添加F12培養(yǎng)基中更為豐富的營(yíng)養(yǎng)成分。
干細(xì)胞研究同樣與 DMEM 培養(yǎng)基緊密相連。DMEM 培養(yǎng)基能夠?yàn)楦杉?xì)胞群體的維持和擴(kuò)增提供適宜環(huán)境。以胚胎干細(xì)胞為例,高糖型 DMEM 培養(yǎng)基憑借充足的能量供應(yīng),助力胚胎干細(xì)胞保持良好的生長(zhǎng)狀態(tài),維持其多能性。在誘導(dǎo)干細(xì)胞分化為特定細(xì)胞類型時(shí),科研人員可根據(jù)需求對(duì) DMEM 培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化,添加特定的生長(zhǎng)因子等成分,引導(dǎo)干細(xì)胞向目標(biāo)細(xì)胞分化。比如,在神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元細(xì)胞分化的研究中,通過(guò)調(diào)整 DMEM 培養(yǎng)基成分,促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的分化進(jìn)程,為神經(jīng)再生醫(yī)學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。
含豐富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成(采用平衡鹽溶液溶解)與合成培養(yǎng)基(如MEM細(xì)胞培養(yǎng)基)以1:1的比例混合使用。目前用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。此外,血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,能與來(lái)自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),甚至造成細(xì)胞死亡。目前,血清多作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用,使用濃度一般為5~20%,常用是10%。由于水解乳蛋白和血清成份復(fù)雜,批間差異大及存在病毒等外源污染風(fēng)險(xiǎn),對(duì)下游生物制品的分離純化和安全性都存在較大的影響,在生物制藥行業(yè)的使用也越來(lái)越少。因此,基于對(duì)血漿成份的分析,合成細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)運(yùn)而生。合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基。開(kāi)發(fā)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(minimalessentialmedium,MEM)。M199全稱Medium 199,廣泛應(yīng)用于各種動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng),包括一些非哺乳類動(dòng)物細(xì)胞。
在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)踐中,選擇合適的 DMEM 培養(yǎng)基至關(guān)重要。對(duì)于生長(zhǎng)較快、粘附性低的細(xì)胞,如某些腫瘤細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞,高糖型 DMEM 培養(yǎng)基是理想之選,其高濃度葡萄糖能充分滿足這類細(xì)胞對(duì)能量的高需求,促進(jìn)細(xì)胞快速生長(zhǎng)。而對(duì)于一些原代細(xì)胞,因其對(duì)培養(yǎng)環(huán)境更為敏感,可能需要低糖型 DMEM 培養(yǎng)基,并根據(jù)細(xì)胞來(lái)源和特性添加特定的生長(zhǎng)因子、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑等,定制專屬培養(yǎng)方案,為原代細(xì)胞提供**適宜的生長(zhǎng)條件,提高原代細(xì)胞培養(yǎng)的成功率。RPMI 1640 培養(yǎng)基含有生物素、 維生素 B12 以及 PABA,這些成分是 Eagle’s MEM 和DMEM所不具備的。四川實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)基批發(fā)廠
Dulbecco’s 改良培養(yǎng)基與MEM培養(yǎng)基相比,氨基酸的含量增加了2倍,維生素的含量增加了4倍。湖北華晨陽(yáng)細(xì)胞培養(yǎng)基檢測(cè)
門)冬氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸和甘氨酸7種NEAA,能降低細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞自身生產(chǎn)非必須氨基酸的副作用,有效促進(jìn)細(xì)胞增殖代謝。葡萄糖可以根據(jù)研究需要,隨意調(diào)節(jié)葡萄糖的濃度,方便快捷。高糖型培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于生長(zhǎng)快、粘附性低的細(xì)胞、雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞、克隆細(xì)胞、DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞、各種原代病毒宿主細(xì)胞、單一細(xì)胞的培養(yǎng)以及疫苗的生產(chǎn),例如利用CHO細(xì)胞表達(dá)EPO和生產(chǎn)乙肝疫苗。低糖培養(yǎng)基更適合代謝作用較慢、依賴性貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。HEPES是一種優(yōu)良的生物緩沖劑,對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用,添加HEPES的培養(yǎng)基能夠較長(zhǎng)時(shí)間保持恒定的PH范圍,可以有效的防止培養(yǎng)液PH波動(dòng)較大對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生不利的影響??捎糜跓o(wú)CO2培養(yǎng)箱。酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為PH值的指示劑,用以持續(xù)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)液的酸堿度,在低PH值時(shí)酚紅使培養(yǎng)液呈黃色,而較高的PH值時(shí)使培養(yǎng)液呈紫色,PH值~,**適合細(xì)胞培養(yǎng)。但酚紅也有一些缺點(diǎn),研究表明酚紅可以模擬固醇類***(特別是雌***)的作用,因此在用到雌***敏感的細(xì)胞時(shí)(如乳腺組織),**好使用不含酚紅的培養(yǎng)基。酚紅會(huì)干擾流式細(xì)胞分析時(shí)候的檢測(cè)。此外,一些無(wú)血清培養(yǎng)基的配方中若存在酚紅會(huì)干擾鈉-鉀平衡。湖北華晨陽(yáng)細(xì)胞培養(yǎng)基檢測(cè)
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